Analisi

Purezza con la cromatografia

La cromatografia liquida ad alte prestazioni in fase inversa spinge un campione disciolto attraverso una colonna che trattiene le molecole in base a quanto respingono l'acqua. Un rivelatore misura l'assorbimento nell'ultravioletto, di solito tra 214 e 220 nanometri, dove assorbe il legame peptidico stesso. La purezza si esprime come area del picco principale in percentuale su tutti i picchi.

Identità con la spettrometria di massa

La spettrometria di massa misura la massa della molecola, di solito dopo ionizzazione elettrospray o con strumenti MALDI a tempo di volo. Una massa misurata che coincide con quella calcolata dalla sequenza conferma che il componente principale è la catena voluta. Rivela anche le delezioni, in cui manca un residuo.

Purezza non vuol dire contenuto

Una polvere pura al 99 per cento secondo la cromatografia non è peptide per il 99 per cento del peso. I controioni rimasti dalla purificazione e l'acqua residua sono invisibili al rivelatore ultravioletto e possono costituire una parte non trascurabile della massa. Il contenuto netto di peptide si misura a parte, classicamente con l'analisi degli amminoacidi.

Altre misure

• Contenuto d'acqua, con la titolazione di Karl Fischer.
• Contenuto di controioni, come acetato o trifluoroacetato, con la cromatografia ionica.
• Endotossine batteriche, con il test del lisato di amebociti di Limulus o le alternative ricombinanti.
• Sterilità, con metodi colturali definiti nelle farmacopee.

Leggere un certificato di analisi

Un certificato di analisi riassume i risultati per un lotto di produzione: quali metodi sono stati usati, che cosa è stato misurato e quando. Descrive il campione che è stato analizzato. Non prova che una sostanza sia sicura, approvata o adatta a un qualsiasi uso, e non dice nulla su un lotto diverso.

Chimica generale, scritta per orientarsi. Non descrive come si usa alcuna sostanza.